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【產(chǎn)品名稱】: 絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Epidermophyton floccosumPCR
【貨號】: BKP3646

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

豚鼠皮膚細胞;GP-S1 牛腎細胞，MDBK細胞 PA12細胞，小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3)DDM月桂?；溠刻擒?/span>500毫克高，98%

人張氏肝細胞;Chang liver甜菜減言醋鹽 Bqtcinq xy7nochloridq;Lycinq xy7nochloridq;Oxynqurinq xy7nochloridq;TriMqthyl glycocoll xy7nochloridq;1-Ccrboxy-N,N,N-triMqthylMqthcncMiniuM chloridq; 290-46-2

JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM2 / CD322 / VE-JAM 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲基綠 Methyl Green (Dye content, ≥85%) 7114-3-6 1G 染色劑

肺泡上皮細胞培養(yǎng)基AEpiCM乳糖復(fù)發(fā)酵管培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：2～8℃25毫升

MET Others Canine 狗 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) 2.5-雙(4-聯(lián)本基)-1.3.4-噁二唑NA
原代心肌細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml鹽酸索他洛爾Sotalol HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EDAR Others Rat 大鼠 EDAR 人細胞裂解液 (陽性對照) H-89(PKA抑制劑)H-89 2HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,10mg/ml,進分

大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞完全培養(yǎng)基 100mL夫西地酸Fusidine質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

HaCaT人永生化表皮細胞 HaCaT immortalized human epidermal cells DMEM+10% FBS夫西地酸(標準品)Fusidine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

IFNA4 Protein Rat 重組大鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標簽)3--L-酪氨酸3-Iodo-L-tyrosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
人肝臟間充質(zhì)干細胞HMSC-hp半乳糖（標準品）D-GALACTOSE 1-[2-(2-AZIDOETHOXY)ETHOXYETHYL]-2,3,4,6-TETRA-O-ACETATE質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

TLK1 Others Human 人 TLK1 / PKU-beta 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 富馬酸氯馬斯汀（標準品）Clemastine fumarate質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測定

VERO細胞衍生株;SVP富馬酸氯馬斯汀Clemastine fumarate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CGM1細胞，EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞 人結(jié)直腸腺癌細胞,LS174T細胞 CM-R029大鼠腸平滑肌細胞完全培養(yǎng)基100mL富馬酸酮替芬（標準品）Ketotifen fumarate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

正常大鼠腎細胞;NRK-52E己內(nèi)酰胺（標準品）2-Oxohexamethylenimine質(zhì)量規(guī)格：供檢查用
絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6雌激素酮 β-D-葡萄糖苷酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Estrone β-D-Glucuronide  Salt

EM2 Others Human 人 EM2 人細胞裂解液 (陽性對照) ?8,9-脫氫雌激素酮 3-硫酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口?8,9-Dehydro Estrone 3-Sulfate  Salt

人羊膜上皮細胞雌激素酮-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進口Estrone-d4

NA Others H9N2 甲型 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 克林霉素質(zhì)量規(guī)格：美國進口Clindamycin

人胚;MRC-54-羥基氨苯蝶啶質(zhì)量規(guī)格：美國進口4-Hydroxy Triamterene
PCR檢測試劑盒

絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。